葡聚糖凝膠G-200操作說明書

中文名：葡聚糖凝膠G200

中文別名：交聯(lián)葡聚糖凝膠 G-200；交聯(lián)右旋糖酐凝膠 G-200

英文名：Sephadex G-200；Cross-inked dextran gel G-200

供應(yīng)商：上海遠慕

分離范圍：5000-600000

干顆粒直徑：40～120um 

分子量分級范圍：A.肽及球形蛋白質(zhì)：5000～800000；B. 葡聚糖（線性分子）：1000～200000 

床體積毫升/克干分子篩：30～40ml/g 

得水值：20.0±2.0 

溶脹zui少平衡時間（h）：室溫72h（20℃）；沸水浴5h（90℃） 

柱頭壓力（kpa）(2.5cm直徑柱)：0.39～1.57 

PH：2～13 

性狀：白色珠粒，屬親水性凝膠。性穩(wěn)定，不溶于水、弱酸和堿溶液，遇強酸能使糖苷鍵分解。 

用途：用于凝膠過濾，肽類分離、脫鹽，分子量測定。 

保存：RT  

適用范圍：本產(chǎn)品僅供科研使用！

葡聚糖凝膠G-200簡介：

葡聚糖凝膠G-200,白色珠狀顆粒。一種由葡聚糖經(jīng)醚鍵相互交聯(lián)合成具有多孔性三度空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子分離材料，為穩(wěn)定的親水性凝膠，G-10是表示G類凝膠吸水量的型號?？蓪后的數(shù)字除以10即為該凝膠每克干重所吸水分的毫升數(shù)。能使一定分子量范圍的大分子進入凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)，不溶于水、鹽 分離和提純蛋白質(zhì)、多糖、酶、核酸、激素、氨基酸、多酞和抗菌素等。薄層色譜支持物。

葡聚糖凝膠G-200操作流程：

1.乙醇浸泡

在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

2.無鹽水浸泡   

室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹。

3.鹽酸浸泡    

在常溫下再用0.1M HCl浸泡12小時，間隙攪拌，濾干，水洗只中性。

4.裝柱  

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

5.平衡  

上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）。

6.上樣  

凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm 以下，過高的凝膠層會引起較大的反壓，應(yīng)當盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為5：1即可。

7.洗脫方法      

可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

8.清洗      

每次用完之后，將柱子里的緩沖液置換為去離子水，然后用20%的乙醇封存。

9.在位清洗（CIP）      

凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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