細胞培養(yǎng)作為很多實驗的基礎(chǔ)，在生物工程領(lǐng)域的重要性不言而喻?，F(xiàn)在，隨著昆蟲桿狀病毒表達載體系統(tǒng)（BEVS）的廣泛應(yīng)用，昆蟲細胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年，昆蟲細胞培養(yǎng)起始，經(jīng)過一百多年的發(fā)展，已在細胞、分子、醫(yī)學(xué)等方向廣泛應(yīng)用。目前，常用于培養(yǎng)的昆蟲細胞以草地貪夜蛾細胞株Sf9和Sf21，以及粉紋夜蛾細胞株Tn5B1-4（商品名High Five）為主。

　　下面遠慕以Sf9為例，具體講解一下昆蟲細胞培養(yǎng)的要點：

　　細胞基本信息：

　　Sf9昆蟲細胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織，是利用桿狀病毒表達系統(tǒng)進行重組蛋白表達的合適宿主。雖然以往人們利用由培養(yǎng)瓶和含血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成的靜止培養(yǎng)系統(tǒng)進行昆蟲細胞的培養(yǎng)，但是一般而言昆蟲細胞并無貼壁依賴性，更適于進行懸浮培養(yǎng)。

　　細胞特性：

　?。?）細胞靜置培養(yǎng)時半貼壁生長，也可以使用搖瓶懸浮培養(yǎng)；

　　靜置培養(yǎng)時細胞會大量附著瓶底生長，呈半貼壁狀態(tài)，會有少部分細胞懸浮生長；搖瓶培養(yǎng)時可以很快適應(yīng)懸浮生長，呈單個或小聚團懸浮生長。

　?。?）對溫度極為敏感；

　　細胞需盡量控制在26~28℃培養(yǎng)，以保證細胞生長狀態(tài)；若溫度低于26℃，細胞生長速度會變慢，但恢復(fù)溫度后生長速度會逐漸恢復(fù)，不會對細胞產(chǎn)生過大傷害；若溫度28℃~30℃，細胞生長嚴(yán)重受限；若溫度高于30℃，細胞將受到不可逆?zhèn)?，即使溫度恢?fù)也無法恢復(fù)正常生長狀態(tài)；同時注意使用的培養(yǎng)基、PBS及其他試劑應(yīng)保持室溫（最好26~28℃），另外盡量減少觀察細胞次數(shù)和時間。

　?。?）細胞可以適應(yīng)多種培養(yǎng)體系。

　　該細胞多用于真核細胞蛋白表達系統(tǒng)，因此針對該細胞有諸多培養(yǎng)體系，例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養(yǎng)體系，包括含血清的培養(yǎng)體系和不含血清的培養(yǎng)體系，可以根據(jù)自身實驗需要選擇逐步更換為合適的培養(yǎng)體系。

　　昆蟲細胞培養(yǎng)注意事項：

　　昆蟲細胞傳代/凍存/復(fù)蘇的一般步驟與哺乳動物細胞相同，但有些關(guān)鍵點又有所不同。

　?。?）昆蟲細胞應(yīng)于28°C、非濕化環(huán)境中培養(yǎng)。培養(yǎng)昆蟲細胞時建議不要進行CO2交換，所以培養(yǎng)瓶選擇密閉蓋；

　?。?）使用昆蟲細胞專用的培養(yǎng)基；

　?。?）貼壁昆蟲細胞：細胞密度低于匯合狀態(tài)的20%時，細胞生長會受到抑制。健康狀態(tài)最hao的細胞是對數(shù)期收獲的細胞，故昆蟲細胞應(yīng)在對數(shù)期傳代。但是，如果培養(yǎng)的是強貼壁性昆蟲細胞，則應(yīng)在細胞達到匯合狀態(tài)或者剛剛開始從培養(yǎng)瓶底部脫離時進行傳代，因為此時細胞容易脫離；

　?。?）某些昆蟲細胞系可能需要一定的過程來適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。進行細胞懸浮培養(yǎng)時無需更換培養(yǎng)基。定期傳代時需要吸出細胞懸液，然后加入適量培養(yǎng)基，將細胞稀釋到適當(dāng)?shù)拿芏取Ｌ砑有迈r培養(yǎng)基后可使細胞營養(yǎng)素達到wan全補充；

　?。?）貼壁昆蟲細胞在無血清培養(yǎng)條件下，昆蟲細胞與基質(zhì)貼附極為牢固，需要花費較大力氣才能使其脫落。要使細胞脫落，最佳的方法是蓋緊瓶蓋，并以瓶蓋朝上的方向抓住培養(yǎng)瓶，在臺面上以中等力量敲擊瓶底2~3次，這樣將會有足夠的細胞解離下來用于傳代。

　　注意：

　　千萬不要劇烈搖晃培養(yǎng)瓶，昆蟲細胞對吹打、氣泡等機械損傷非常敏感，若吹打力度過大、氣泡過多將嚴(yán)重影響細胞生長狀態(tài)，甚至造成細胞損傷。