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培養(yǎng)基的配制原理與操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):485 更新時(shí)間:2024-06-17

  培養(yǎng)基的配制原理
  
  按照微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求及其相互比例配制的。
  
  一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì),培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境,培養(yǎng)基種類很多。
  
  根據(jù)配制原料的來(lái)源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。


M-綠色酵母菌-霉菌培養(yǎng).jpg

  
  配制培養(yǎng)基的步驟
  
  1、配制溶液
  
  向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,按照培養(yǎng)基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最后補(bǔ)足所需水分。對(duì)蛋白胨、肉膏等物質(zhì),需加熱溶解,加熱過(guò)程所蒸發(fā)的水分,應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。
  
  配制固體培養(yǎng)基時(shí),先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續(xù)加熱至wan全融化。并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。
  
  2、調(diào)節(jié)pH值
  
  用pH試紙(或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì))測(cè)試培養(yǎng)基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。
  
  3、過(guò)濾
  
  用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過(guò)濾。用紗布過(guò)濾時(shí),最好折疊成六層,用濾紙過(guò)濾時(shí),可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過(guò)濾。
  
  4、分裝
  
  已過(guò)濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。如果要制作斜面培養(yǎng)基,須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基,則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶?jī)?nèi)。
  
  分裝時(shí),一手捏松彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí),注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。
  
  裝入試管的培養(yǎng)基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí),每只15×150毫米的試管,約裝3~4毫升(1/4~1/3試管高度),如制作深層培養(yǎng)基,每只20×220毫米的試管約裝12~15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,一般以其容積的一半為宜。
  
  5、加棉塞
  
  分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過(guò)濾空氣,避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無(wú)法使用。
  
  制作棉塞時(shí),要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握,就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞。
  
  棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過(guò)緊過(guò)松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi),上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,準(zhǔn)備滅菌。
  
  6、制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基
  
  培養(yǎng)基滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。
  
  (1)制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5~1米左右的木條,厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。
  
  (2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過(guò)菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度。
  
  鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置過(guò)來(lái),平放在恒溫箱里,24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基未長(zhǎng)雜菌,即可用來(lái)培養(yǎng)微生物。

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