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麗春紅染色液的配制與使用
點擊次數(shù):426 更新時間:2023-11-01

  麗春紅(Ponceau S)也稱猩紅,可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合,同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結合,從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。

  麗春紅對蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸餾水,PBS或其它適當溶液洗去。因此,蛋白質(zhì)N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉移到PVDF膜,用麗春紅染色后將目的條帶切下用于測序。

  注意:麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測。

  麗春紅染色液的配制

  常用的麗春紅染色液有兩種:一種用乙酸配制,另外一種用三lv乙酸(TVA)和5-磺基水楊酸(5-Sulfosalicylic acid)配制。配制方法如下:

  一、用乙酸配制成分:0.1%(w/v)麗春紅,5%(v/v)乙酸,ddH2O。

  4 ℃保存,不要凍上。也可以配成“0.2%(w/v)麗春紅,3%(v/v)乙酸,ddH2O"。

  二、用三lv乙酸和5-磺基水楊酸成分:2% (w/v)麗春紅,30%的三lv乙酸,30%的5-磺基水楊酸。

  麗春紅染色液使用說明

  將PVDF膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒在麗春紅染色液中,搖動5-10分鐘或更長時間;取出印跡膜,用蒸餾水,PBS或其它適當溶液漂洗2-3次,可出現(xiàn)清晰條帶,記錄結果;用蒸餾水,PBS或其它適當溶液漂洗2-3次,每次3-5分鐘,去除麗春紅,進行后續(xù)的WB檢測。

  補充:麗春紅染色液也可以直接用來染PAGE膠,不過,在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE膠,起到固定蛋白的作用。


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