上海遠慕為您提供人血管生長素（ANG）ELISA檢測試劑盒，我司是經(jīng)銷生物科學領(lǐng)域的供貨商，自公司成立以來，企業(yè)規(guī)模迅速發(fā)展中，生產(chǎn)加工和銷售的產(chǎn)品包括各種化學試劑、培養(yǎng)基、各種ELISA試劑盒、標準品等5萬余種類。在業(yè)內(nèi)有*好評，咨詢！

    產(chǎn)品中文名：人血管生長素（ANG）ELISA試劑盒

    別名：人血管生長素（ANG）ELISA kit

    供貨商：上海遠慕

    規(guī)格：96T/48T

    保存：2-8℃

    經(jīng)營種類：進口分裝和原裝、國產(chǎn)。

    試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

    樣本：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

    預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

    應(yīng)用領(lǐng)域：僅供科研使用，不得用于醫(yī)學診斷，使用前仔細閱讀本說明書。

    產(chǎn)品原理：血管生長素（angiogenin），單鏈結(jié)構(gòu)的多肽，由人肺中得到的血管生長素由123個氨基酸組成，分子量近14000，35％的氨基酸與胰腺的RNase相似，在兔角膜中，50ng就能促進血管形成。它對于核糖核苷酸酶的某些傳統(tǒng)底物，如小麥胚芽RNA，PolyC等都沒有活性。然而人胎盤中RNase抑制劑能破壞血管生長素的活性。它不與肝素結(jié)合。

    特點：

    1. 安全、快速、重復(fù)性好；

    2. 特異性100%，靈敏度超過90%；

    3. 探針性能穩(wěn)定，低溫保存一年以上；

    4. 熒光信號強，結(jié)果判定直觀可靠；

    5. 操作簡單，定位精準，無實驗污染。

    人血管生長素（ANG）ELISA試劑盒技術(shù)原理：

    （1）抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

    （2）結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

    （3）酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

    （4）受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

    （5）此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

    （6）加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。

    樣本處理及要求：

    1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

    2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

    3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

    5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

    1. 包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml，在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

    2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

    3. 加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

    4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

    5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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